Viimasel ajal on välja töötatud usaldusväärne, ülitundlik ja kiire meetod inimese erinevate nakkushaiguste diagnoosimiseks. Seda meetodit nimetatakse "PCR-analüüsiks". Mis see on, mis on selle olemus, milliseid mikroorganisme see võib paljastada ja kuidas seda õigesti võtta, räägime meie artiklis.
Avastuste ajalugu
Leiutas polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) meetodi Ameerika teadlane Kary Mullis 1983. aastal. Algselt patenteeris diagnostikameetodi Cetus Corporation, milles selle looja töötas. Kuid 1992. aastal müüdi kõik õigused ja patendid Hoffman-La Roche'ile. Pärast seda selgus, et sarnaseid uuringuid viidi läbi paralleelselt ja need registreerisid teised Ameerika bioloogid, nagu Alice Chen, David Edgar, John Trell. 1980. aastal tegelesid selle probleemiga ka Nõukogude teadlased A. Sljusarenko, A. Kaledin ja S. Gorodetski. Seetõttu oli võimatu kindlaks teha ainsat autoriõiguste valdajat. Paljud silmapaistvad biokeemikud on andnud teatud panuse polümeraasi ahelreaktsiooni tehnika arendamisse ja patenteerinud oma uuendused. Praegu on analüüsPCR-i tehakse kõikjal spetsiaalselt varustatud laborites.
PCR diagnostikameetodi olemus
PCR-analüüs: mis see on ja kuidas see toimib? Meetodi olemus seisneb teatud mikroobse keskkonna mahu suurendamises tehistingimustes kasutades spetsiaalset DNA polümeraasi ensüümi. Selleks korrutatakse olemasolev DNA materjal mitu korda. Seega suureneb patogeense mikroorganismi olemasolul proovis biokeemiliste laboratoorsete manipulatsioonide tõttu selle kogus ning bakterit ei ole mikroskoobi all raske tuvastada.
Kuidas materjaliuuringuid tehakse?
Analüüsiks nõutav:
- DNA maatriks;
- krundid, mis ühendavad materjali tüki otsad;
- kuumakindel DNA polümeraasi ensüüm;
- kemikaalid, mis panevad ensüümid korralikult tööle;
- puhverlahus, mis on vajalik sobivate tingimuste loomiseks DNA materjali kasvuks ja arenguks.
PCR teostamiseks tehakse 25-30 kordust, mis koosnevad kolmest etapist: denatureerimine, lõõmutamine ja elongatsioon.
Polümeeri ahelreaktsiooni analüüsiks kasutatakse spetsiaalset seadet - võimendit. Kaasaegsed seadmed võimaldavad seadistada kütte- ja jahutustorude jaoks vajaliku programmi, et diagnostika käigus vigu kõrvaldada.
Kus diagnostikat kasutatakse?
Polümeeri ahelreaktsiooni meetodit kasutatakse erinevates meditsiinivaldkondades:
- kriminalistid koossee tuvastab geneetilise materjali, nagu juuksed, sülg või veri;
- PCR vereanalüüs aitab genotüpiseerida, näiteks tuvastada individuaalset geneetiliselt loomupärast reaktsiooni teatud ravimile;
- kasutades seda meetodit inimestevaheliste peresidemete loomiseks;
- Meditsiinidiagnostikas on saanud populaarseimaks PCR-meetodiks erinevate nakkushaiguste määramiseks.
Milliseid infektsioone PCR tuvastab?
Niisiis, meditsiin on pikka aega ja eduk alt kasutanud PCR analüüsi. Mis see on, me juba teame. Ja milliseid patogeene saab sellega tuvastada? PCR-meetodil diagnoositakse järgmisi nakkushaigusi:
- hepatiit A, B, C;
- ureaplasmoos;
- kandidoos;
- klamüüdia;
- mükoplasmoos;
- gardnerelloos;
- nakkuslik mononukleoos;
- trihhomonoos;
- papilloomiviiruse infektsioon;
- tuberkuloos;
- herpesinfektsiooni tüübid 1 ja 2;
- helikobakterioos;
- tsütomegaloviirus;
- difteeria;
- salmonelloos;
- HIV-infektsioon.
Samuti kasutatakse PCR meetodeid vähi diagnoosimisel.
Meetodi eelised
PCR diagnostikal on mitmeid eeliseid:
- Kõrge tundlikkus. Isegi ainult mõne mikroorganismi DNA molekuli juuresolekul määrab PCR-analüüs infektsiooni olemasolu. Meetod aitab krooniliste ja varjatud haiguste korral. Sageli sellistel juhtudel mikroorganismon muidu harimatu.
- Uurimiseks sobivad kõik materjalid, näiteks sülg, veri, suguelundite eritised, juuksed, epiteelirakud. Kõige tavalisem on vere ja urogenitaal-ära analüüs PCR jaoks.
- Pikaajalist saaki pole vaja. Automatiseeritud diagnostikaprotsess võimaldab teil saada uuringu tulemused 4-5 tunni pärast.
- Meetod on peaaegu 100% usaldusväärne. Registreeritud on ainult üksikud valenegatiivsete tulemuste juhtumid.
- Võimalus tuvastada ühest materjaliproovist mitut tüüpi patogeene. See mitte ainult ei kiirenda haiguse diagnoosimise protsessi, vaid vähendab oluliselt ka materjalikulusid. Sageli määrab arst põhjaliku PCR-analüüsi. Uuringu hind, mis koosneb kuue patogeeni määramisest, on umbes 1500 rubla.
Soovitused analüüsiks valmistumiseks
Selleks, et tulemused oleksid PCR-uuringu ajal usaldusväärsed, peate sooritama testi, järgides soovitusi diagnoosimiseks ettevalmistamiseks:
- Enne sülje loovutamist peaksite hoiduma söömisest ja ravimite võtmisest 4 tundi enne proovide võtmist. Vahetult enne protseduuri loputage suud keedetud veega.
- Eelnimetatud reegleid tuleks järgida ka põse sisepinn alt proovi võtmisel. Pärast loputamist on soovitatav teha kerge nahamassaaž, et esile tõsta näärme sekretsiooni.
- Uriini kogutakse tavaliselt kodus. Selleks peate läbi viima põhjaliku tualetisuguelundid. Koguge 50-60 ml uriini steriilsesse plastmahutisse. Materjali puhtuse tagamiseks on naistel soovitatav tuppe sisestada tampoon, meestel nahavolti võimalikult palju tagasi tõmmata. Ärge annetage oma menstruatsiooni ajal.
- Sperma loovutamiseks peate hoiduma seksuaalvahekorrast 3 päeva enne proovi võtmist. Samuti soovitavad arstid mitte käia saunas ja kuumas vannis, juua alkoholi ja vürtsikat toitu. 3 tundi enne testi peate hoiduma urineerimisest.
- Näiteks urogenitaalproovi võtmiseks, kui tehakse PCR-test klamüüdia suhtes, soovitatakse nii naistel kui meestel 3 päeva seksuaalset puhkust. 2 nädalat enne analüüsi ei tohi võtta antibakteriaalseid ravimeid. Nädalaks peate lõpetama intiimsete geelide, salvide, vaginaalsete ravimküünalde, douching'i kasutamise. 3 tundi enne uuringut peate hoiduma urineerimisest. Menstruatsiooni ajal proove ei võeta, vaid 3 päeva pärast verevoolu lõppemist võite võtta urogenitaalse määrdumise.
PCR raseduse ajal
Imikuootuse perioodil on paljud sugulisel teel levivad infektsioonid loote normaalsele arengule äärmiselt ohtlikud. Suguhaigused võivad esile kutsuda emakasisest kasvupeetust, raseduse katkemist või enneaegset sünnitust, lapse kaasasündinud väärarenguid. Seetõttu on raseduse alguses väga oluline läbida PCR-uuring. Registreerumisel on vajalik läbida analüüs - kuni 12 nädalat.
Materjal võetakse spetsiaalse harja abil emakakaela kanalist. Protseduur on valutu ega kujuta endast ohtu lapsele. Tavaliselt tehakse raseduse ajal klamüüdia analüüs PCR-meetodil, samuti ureaplasmoosi, mükoplasmoosi, tsütomegaloviiruse, herpese, papilloomiviiruse analüüs. Sellist uuringute kompleksi nimetatakse PCR-6.
PCR HIV diagnoosimiseks
Kuna polümeraasi ahelreaktsiooni meetod on väga tundlik organismis toimuvate muutuste ja diagnoosi tingimuste suhtes, võivad tulemust mõjutada paljud tegurid. Seetõttu ei ole HIV-nakkuse PCR-analüüs usaldusväärne meetod, selle efektiivsus on 96–98%. Ülejäänud 2-4% juhtudest annab test valepositiivsed tulemused.
Kuid mõnes olukorras on HIV PCR diagnostika hädavajalik. Tavaliselt antakse seda inimestele, kelle ELISA tulemus on valenegatiivne. Sellised näitajad näitavad, et inimesel ei ole veel tekkinud viirusevastaseid antikehi ja neid ei ole võimalik tuvastada ilma arvu mitmekordse suurenemiseta. Täpselt seda on võimalik saavutada PCR-vereanalüüsi tegemisega.
Need diagnostikad on vajalikud ka HIV-positiivselt em alt sündinud esimese eluaasta lastele. See meetod on ainus viis lapse staatuse usaldusväärseks määramiseks.
PCR hepatiidi diagnoosimiseks
Polümeraasi ahelreaktsiooni meetod võimaldab tuvastada A-, B-, C-hepatiidi viiruse DNA juba ammu enne infektsioonivastaste antikehade teket või haiguse sümptomite ilmnemist. C-hepatiidi PCR-analüüs on eriti tõhus, kuna 85% juhtudest on see haigus asümptomaatiline ja ilmaõigeaegne ravi läheb kroonilisse staadiumisse.
Patogeeni õigeaegne avastamine aitab vältida tüsistusi ja pikaajalist ravi.
Põhjalik PCR-uuring
Kompleksne PCR-analüüs: mis see on? Tegemist on polümeerse ahelreaktsiooni meetodil tehtava uuringuga, mis hõlmab mitut tüüpi infektsioonide samaaegset määramist: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, tsütomegaloviirus, ureaplasma urealiticum, 1. ja 2. tüüpi herpes, gonorröa, papilloomiviirus. Sellise diagnostika hind jääb vahemikku 2000-3500 rubla. olenev alt kliinikust, kasutatud materjalidest ja seadmetest, samuti analüüsi tüübist: kvalitatiivne või kvantitatiivne. Mis on teie puhul vajalik - otsustab arst. Mõnel juhul piisab lihts alt patogeeni olemasolu määramisest, teistel, näiteks HIV-nakkuse korral, mängib olulist rolli kvantitatiivne tiiter. Kõigi ülalnimetatud patogeenide diagnoosimisel nimetatakse uuringut "PCR-12 analüüsiks".
Analüüsitulemuste ärakiri
PCR analüüsi dešifreerimine ei ole keeruline. Indikaatoril on ainult 2 skaalat - "positiivne tulemus" ja "negatiivne tulemus". Patogeeni avastamisel saavad arstid 99% kindlusega kinnitada haiguse esinemist ja alustada patsiendi raviga. Nakkuse määramise kvantitatiivse meetodi korral näitab vastav veerg tuvastatud bakterite arvulist indikaatorit. Ainult arst saab määrata haiguse ulatuse ja määrata vajaliku ravi.
Mõnel juhul, näiteks HIV-nakkuse määramisel PCR-iga, kui tulemus on negatiivne, tuleb saadud näitajate kinnitamiseks läbi viia täiendavad uuringud.
Kus testida?
Kus teha PCR-testi: avalikus kliinikus või eralaboris? Kahjuks on munitsipaalmeditsiiniasutustes seadmed ja meetodid sageli vananenud. Seetõttu on parem eelistada kaasaegsete seadmete ja kõrgelt kvalifitseeritud personaliga eralaboreid. Lisaks saate erakliinikus tulemusi palju kiiremini.
Moskvas pakuvad paljud eralaborid erinevate infektsioonide PCR analüüsi. Näiteks sellistes kliinikutes nagu Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro tehakse PCR analüüs. Uuringu hind on alates 200 rubla. ühe patogeeni tuvastamiseks.
Võib järeldada, et nakkushaiguste diagnoosimine PCR abil on enamikul juhtudel kiire ja usaldusväärne viis patogeeni tuvastamiseks organismis nakkuse varases staadiumis. Kuid siiski tasub teatud juhtudel valida muud diagnostikameetodid. Sellise uuringu vajaduse saab kindlaks teha ainult spetsialist. PCR-analüüsi dešifreerimine nõuab ka professionaalset lähenemist. Järgige oma arsti nõuandeid ja ärge tehke teste, mida te ei vaja.
