WHO statistika kohaselt on viimase 40 aasta jooksul AIDSi surnud 25 miljonit inimest. Selle infektsiooni tekitatud kahju on tohutu. Enamik nakatunutest osutus Aafrikasse, kust see nakkus pärines. HIV-iga muutub haiguse diagnoosimine eriti aktuaalseks. Tõsi, HIV-i ravi veel ei ole, kuid varajane ravi võib pikendada patsiendi eluiga ja parandada selle kvaliteeti.
HIV-nakkuse diagnoos
HIV-nakkus määratakse erinevatel etappidel järgmiste meetoditega:
- ELISA – ensüümi immuunanalüüs.
- Western blot.
- PCR – polümeraasi ahelreaktsioon.
- Kiirtestid.
PCR-meetodi töötas välja Ameerika biokeemik Kary Mullis, kes sai selle eest 1983. aastal Nobeli preemia. Tänapäeval peetakse seda meetodit meditsiinis kõigi infektsioonide diagnoosimisel selle täpsuse ja teabesisu tõttu juhtivaks. HIV pole selles osas erand.
Analüüsi olemus
Iga elusrakk sisaldab RNA-d ja DNA-d. Need nukleiinhapped on võimelised ise kopeerima ja isepaljunema. Iga infektsiooni puhul on DNA fragmendid ainulaadsed. ATbioloogilistes vedelikes ringlevad need nukleiinhapete fragmendid. Need püütakse kinni ja tunnevad ära spetsiaalse varustusega – reaktoriga. See on meetodi alus. Laborant loeb need killud üle. Retroviiruse HIV-d jälgitakse RNA suhtes. Isegi viirusosakeste üksikute koopiate korral suudab PCR neid tuvastada ja lugeda.
Testi vedelikuna kasutatakse kõige sagedamini venoosset verd. Meetodi erikomponendid seonduvad viiruseosakestega ja muudavad need tuvastatavaks, sest leitud fragmendid korrutatakse.
HI-viiruse puhul võib viiruse olemasolu tulemuse saada ammu enne kliiniku ilmumist. Seetõttu on PCR-il oma kõrge tundlikkuse tõttu nii kõrge diagnostiline väärtus. PCR-i tohutu pluss on meetodi mitmekülgsus. Nakatumise inkubatsiooniperiood PCR jaoks ei ole takistuseks.
Uurimiskulud
PCR-meetod on üsna kallis. See on üks selle suuri puudusi. See nõuab uusimat varustust ja kõrgelt kvalifitseeritud laboriassistenti. Eelnevat silmas pidades PCR diagnostikat väikeasulates ei tehta. Te saate end testida ainult spetsialiseeritud suurtes kliinikutes.
HIV DNA testimise hind Moskva kliinikutes algab 2800 rublast, viiruskoormus (viiruse RNA plasmas) määratakse PCR-ga - alates 8800 rubla ja HIV-i resistentsus proteaasi inhibiitorite suhtes - alates 16 500 rubla. Nagu näete, on hinnad üsna kõrged. PCR-i saab MHI poliitika alusel teha avalikes kliinikutes tasuta. Tähtis,et protseduuri saab teha anonüümselt. Registratuuris saab patsient numbri, mille järgi saab tulemuse teada. Kaasaegsetes meditsiinikeskustes on klientide isiklikud kontod, kuhu need andmed sisestatakse.
Uurimiseesmärgid
HIV-i PCR-diagnostika on ette nähtud järgmistel juhtudel:
- Haige ema või lapse kandja poolt sündinud lapse nakkuse tuvastamine emakasisese infektsiooni kindlakstegemiseks.
- Kui ELISA andis küsitavaid tulemusi (HIV PCR aitab sel juhul lõpliku diagnoosi panna).
- Viiruse kvantitatiivse sisalduse tuvastamiseks kehas.
- Positiivse immunobloti korral täiendavad nad üksteist PCR-iga.
- doonorite testimine.
- HI-viiruse varajaseks diagnoosimiseks.
- Tõhususe ja ART-resistentsuse määramiseks.
Selle analüüsi eeliseks on see, et HIV-i PCR-i saab teha isegi alla üheaastastel lastel.
Uuringuid tehakse sageli mitte esmaseks diagnoosimiseks, vaid juba ravi käigus. Esmane diagnostika on seroloogilised uuringud (need määravad HIV-vastaste antikehade taseme). Kui valepositiivne tulemus kordub, võib selle põhjuseks olla madal viiruskoormus.
PCR diagnoosib HIV-i, kui selle vastu pole veel antikehi. ELISA meetod sel juhul vastust ei anna.
Ja HIV PCR on juba positiivne. Kuid selle HIV-perioodi sümptomid on mittespetsiifilised. Esm alt ravib üldarst patsienti pikka aega ja ebaõnnestunult ARVI-ga. Tuleb meeles pidada, et HIV-i diagnoos põhineb ainultPCR-i ei panda, on vaja läbida muud põhjalikud testid. PCR-meetod on raskete juhtumite puhul sagedamini abistav.
Analüüsiks valmistumine
Enne HIV PCR-i võtmist, 2 päeva enne testi, ei tohi süüa rasvaseid toite, alkoholi. Samuti on parem mitte vaimselt ja füüsiliselt pingutada. Kui patsiendile määratakse immunostimulatsioonikuur, peatatakse see 2 nädalat enne analüüsi.
Verd on kõige parem võtta hommikul. Uurida saab ka teisi organismi bioloogilisi vedelikke (sperma, tupesekret), kuid veri on parim materjal. Sülge, higi, uriini ja pisaraid ei kasutata, kuna viiruse sisaldus neis on minimaalne.
HIV-i PCR-i plussid
Meetodi eelisteks on äärmiselt väike valepositiivse tulemuse tõenäosus, reaktsiooni universaalsus organismi mis tahes bioloogiliste vedelike suhtes. Analüüsil on lai valik:
- Ühte verevõttu saab kasutada erinevate infektsioonide tuvastamiseks.
- Tehnika on kiireloomuline, tulemus on valmis juba järgmisel päeval.
- Usaldus on 85–98%.
- HI-viiruse olemasolu saab kindlaks teha 10–14 päeva pärast nakatumist (antikehi hetkel veel ei ole).
- Vanusepiiranguta, saab sooritada kohe sünnist alates.
Meetodi miinused
PCR-i puudused on järgmised:
- Analüüsi maksumus.
- Nõuab keerukat meditsiinivarustust.
- Vaja on kõrgelt kvalifitseeritud laborandi ja arsti,kasutaja analüüs.
- Reaktsioon on väga tundlik, seega võib viga olla 20%.
- Võib anda valepositiivse tulemuse, kui patsiendil on autoimmuunsed protsessid, onkoloogia või kroonilised infektsioonid.
- Laboriruumides on vajalik eriline puhtus, sest viirus võib õhust analüüsi sattuda. Siis on tulemus vale.
PCR-i teostavate laborite jaoks on diagnostika kvaliteedi parandamiseks välja töötatud spetsiaalsed ranged meetmed vastav alt SanPiN-i sisekontrollisüsteemile. Lisaks tuleb järgida kõiki selle tehnikaga töötamise reegleid:
- Nõutav on täpselt järgida katseklaasidel olevat teavet.
- Enne vereproovi võtmist vaadake uuesti ja veenduge, et analüüs on ajastatud.
- Õde peab tuubid õigesti märgistama.
- Ristsaastumise vältimiseks peab laborant kõik biomaterjaliga manipulatsioonid õigesti läbi viima.
- Testisüsteem peab olema suurepärase kvaliteediga.
Ainult siis, kui kõik need tingimused on täidetud, võib vastuse viga olla ainult umbes 2% episoodidest.
Analüüsi kestus
Paljud on huvitatud sellest, kui kaua on HIV-i PCR valmis. Diagnoos ei kesta kauem kui 8 tundi. Patsient võib vastuse saada juba järgmisel päeval. Kiirtestimine viiakse läbi 2 tunni jooksul.
PCR-i töökindlus
Hoolimata selle paljudest eelistest ei peeta PCR-i ideaalseks diagnostikameetodiks. Temaga võetakse igaks juhuks ühendustvajadus teha sõeluuringud HIV-i olemasolu kindlakstegemiseks organismis.
Millal võetakse analüüsiks verd?
Kui kaua HIV PCR-i võtta? Usaldusväärse tulemuse saab juba vere võtmisel 4-4 päeva pärast väidetavat nakatumist. Kahe nädala pärast on HIV-i usaldusväärsus 98% ja 5-päevase perioodiga 80%. HIV PCR-i negatiivse tulemuse olemasolu on usaldusväärne, kuid absoluutselt täpse tulemuse saamiseks tehakse ka ELISA.
ELISA analüüs on efektiivne ainult viiruse antikehade olemasolul, see aeg võib kesta 1-3 kuud kuni kuus kuud. Kuna ELISA annab suurema tõenäosuse (98% -99,9%), ei saa PCR-i nimetada HIV-nakkuse olemasolu 100% kinnitavaks testiks. Kuid teisest küljest on see ainus tehnika, mille puhul te ei pea ootama antikehade ilmumist.
HIV puhul võib PCR anda teavet ART tõhususe, HIV-haiguse staadiumi ja VN-ide arvu kohta (kvantitatiivne hinnang HIV esinemise kohta organismis). See näitab muudatuse tõsidust ja ulatust.
HIV-i PCR-test on vajalik ka siis, kui veres on antikehi, kuid nende olemasolu ei viita HIV-nakkuse kliinilisele usaldusväärsusele.
Neid testitakse mitte ainult nakkuste ja juhusliku seksi suhtes. Muudel juhtudel:
- Raseduse planeerimine.
- Eelseisev operatsioon.
- Juhuslik seks.
- Mõnedel kutsealadel on tööle lubamiseks vaja seda testi (õpetajad, arstid ja muud meditsiinitöötajad).
- Vangid.
- TB haiged.
- Eriolukordade ministeeriumi ja politsei töötajad.
- Tagasin puhkuselt eksootilistest riikidest (kui tahad olla kindel, et nakkust pole).
- Prostituudid.
- Välistudengid.
- Narkootikumid.
Samuti võivad patsiendi teatud sümptomid sundida HIV-testi tegema:
- Äkiline kaalulangus.
- Kõhulahtisus, mis kestab kauem kui 3 nädalat
- Pikka aega ebamõistlikult kõrge temperatuur.
- Lümfisõlmede turse.
- Pneumoonia, kandidoosi jne seletamatu põhjus
Analüüsi dešifreerimine on raviarsti, mitte laborandi eelisõigus.
PCR või ELISA, kumb on parem?
Kui HIV-viiruse RNA PCR-diagnoos tuvastatakse nii kvalitatiivselt kui ka kvantitatiivselt. See analüüs tuvastab selgelt konkreetse patogeeni, isegi kui on mitu ristreageerivat patogeeni. Bioloogilist materjali saab kasutada isegi kuivatatud kujul. Negatiivne külg on PCR kõrge tundlikkus, kui valepositiivse tulemuse võib anda isegi väikese koguse võõr-DNA olemasolu instrumentidel või katseklaasis.
ELISA ülesanne ja võimalus on määrata retroviiruse vastaste antikehade olemasolu. Kuigi selle täpsus on 99%, ei ole see algstaadiumis rakendatav.
Kvalitatiivne HIV-testimine
Kvaliteetne HIV-i PCR määrab viiruse olemasolu organismis. Sel juhul näevad tulemused välja järgmised: positiivne, valepositiivne, negatiivne. Kuid see uuring ei anna teavet retroviiruse koguse kohta. Selline kvalitatiivne analüüssobimatu, kui HIV-nakkus on organismis juba muul viisil tuvastatud.
Kvaliteetse PCR-iga on võimatu ravi efektiivsust kontrollida.
HIV-i kvantifitseerimine
Teostavad ainult HIV-nakkusega inimesed, et lugeda viiruse RNA koopiate arvu bioloogilises tootes.
Sellise uuringu eesmärk on jälgida käimasolevat ravi ja teha kindlaks viiruse resistentsus sellele. Viirusevastast ravi sellistes arvutustes ei määra arst pimesi, seega on see tõhusam. HIV-nakkuse kvantitatiivset PCR-i tehakse palju sagedamini. See analüüs kuvatakse koopiana vere ml kohta.
Milliseid tulemusi saab anda:
- Viiruse RNA puudub või on väga väike (umbes 20 koopiat/ml). Diagnoosi kindlus puudub.
- 20–10 kuni 6. kraadini / ml – diagnoos on usaldusväärne.
- Rohkem kui 106 koopiat/ml – kõrge VN.
Laboratooriumid saavad teha HIV-i suhtes reaalajas PCR-testi. See eeldab PCR-produktide kogunemise jälgimist ja arvulist hindamist koos tulemuste automaatse salvestamisega.
