Peaaegu kõigi nakkushaiguste laboratoorne diagnostika põhineb seroloogiliste reaktsioonide meetodil patogeeni antigeenide vastu toodetud antikehade tuvastamisel patsiendi veres. Nad asusid meditsiinipraktikasse üheksateistkümnenda sajandi lõpust kahekümnenda sajandi alguseni.
Teaduse areng on aidanud määrata mikroobide antigeenset struktuuri ja nende toksiinide keemilisi valemeid. See võimaldas luua mitte ainult terapeutilisi, vaid ka diagnostilisi seerumeid. Need saadakse nõrgestatud patogeenide manustamisel laboriloomadele. Pärast mitmepäevast kokkupuudet kasutatakse küülikute või hiirte verd preparaatide valmistamiseks, mida kasutatakse mikroobide või nende toksiinide tuvastamiseks seroloogiliste testide abil.
Sellise reaktsiooni väline ilming sõltub selle tekketingimustest ja antigeenide seisundist patsiendi veres. Kui mikroobiosakesed on lahustumatud, sadestuvad, lüüsivad, seonduvad või immobiliseeruvad nad seerumis. Kui antigeenid on lahustuvad, ilmneb neutraliseerimise või sadestumise nähtus.
Aglutinatsioonireaktsioon (RA)
Seroloogiline aglutinatsioonitest on väga spetsiifiline. Seda on lihtne teostada ja üsnavisuaalne, et kiiresti määrata antigeenide olemasolu patsiendi vereseerumis. Seda kasutatakse Vidali reaktsiooni (tüüfuse ja paratüüfuse diagnoosimine) ja Weigli (tüüfuse palavik) testimiseks.
See põhineb spetsiifilisel interaktsioonil inimese antikehade (või aglutiniinide) ja mikroobirakkude (aglutenogeenide) vahel. Pärast nende koostoimet tekivad osakesed, mis sadestuvad. See on positiivne märk. Reaktsiooni käivitamiseks võib kasutada elusaid või tapetud mikroobseid aineid, seeni, algloomi, vererakke ja somaatilisi rakke.
Keemiliselt jaguneb reaktsioon kaheks etapiks:
- Antikehade (AT) spetsiifiline seos antigeenidega (AG).
- Mittespetsiifiline – AG-AT konglomeraatide sadestumine, st aglutinaadi moodustumine.
Kaudne aglutinatsioonireaktsioon (IPHA)
See reaktsioon on tundlikum kui eelmine. Seda kasutatakse bakterite, rakusiseste parasiitide ja algloomade põhjustatud haiguste diagnoosimiseks. See on nii spetsiifiline, et on võimalik tuvastada isegi väga väikeseid antikehade kontsentratsioone.
Selle tootmiseks kasutatakse puhastatud lamba erütrotsüüte ja inimese punaseid vereliblesid, mida on eelnev alt töödeldud antikehade või antigeenidega (olenev alt sellest, mida laborant soovib leida). Mõnel juhul ravitakse inimese punaseid vereliblesid immunoglobuliinidega. Erütrotsüütide seroloogilised reaktsioonid loetakse toimunuks, kui need on settinud toru põhja. Umbes positiivsest reaktsioonistütleme, kui rakud on paigutatud ümberpööratud vihmavarju kujul, mis hõivavad kogu põhja. Negatiivne reaktsioon loetakse, kui erütrotsüüdid settivad veergu või põhja keskel asuva nupu kujul.
Sadestumisreaktsioon (RP)
Seda tüüpi seroloogilisi reaktsioone kasutatakse väga väikeste antigeeniosakeste tuvastamiseks. Need võivad olla näiteks valgud (või nende osad), valkude ühendid lipiidide või süsivesikutega, bakterite osad, nende toksiinid.
Reaktsiooniseerumid saadakse loomade, tavaliselt küülikute kunstliku nakatamise teel. Selle meetodi abil saate absoluutselt igasuguse sadestava seerumi. Seroloogiliste sadenemisreaktsioonide toimemehhanism on sarnane aglutinatsioonireaktsioonidele. Seerumis sisalduvad antikehad ühinevad kolloidlahuses antigeenidega, moodustades suuri valgumolekule, mis ladestuvad tuubi põhjale või substraadile (geelile). Seda meetodit peetakse väga spetsiifiliseks ja sellega saab tuvastada isegi tühised kogused ainet.
Kasutatakse katku, tulareemia, siberi katku, meningiidi ja muude haiguste diagnoosimiseks. Lisaks osaleb ta kohtuarstlikus ekspertiisis.
Geelsadestamise reaktsioon
Seroloogilisi reaktsioone saab läbi viia mitte ainult vedelas keskkonnas, vaid ka agargeelis. Seda nimetatakse hajussadestamise meetodiks. Tema abiga uuritakse komplekssete antigeensete segude koostist. See meetod põhineb antigeenide kemotaksilsel antikehadele ja vastupidi. Geelis nad liiguvadüksteise poole erineva kiirusega ja kokkusattudes moodustavad sademejooned. Iga rida on üks komplekt AG-AT.
Eksotoksiinide neutraliseerimise reaktsioon antitoksiiniga (PH)
Toksilisusevastased seerumid on võimelised neutraliseerima mikroorganismide poolt toodetud eksotoksiinide toimet. Need seroloogilised reaktsioonid põhinevad sellel. Mikrobioloogia kasutab seda meetodit seerumite, toksiinide ja toksoidide tiitrimiseks ning nende terapeutilise toime määramiseks. Toksiini neutraliseerimise võimsus määratakse tavaliste ühikutega - AE.
Lisaks on tänu sellele reaktsioonile võimalik määrata eksotoksiini liik või tüüp. Seda kasutatakse teetanuse, difteeria, botulismi diagnoosimisel. Uuringut saab läbi viia nii "klaasil" kui ka geelis.
Lüüsireaktsioon (RL)
Immuunseerumil, mis siseneb patsiendi kehasse, on lisaks passiivse immuunsuse põhifunktsioonile ka lüüsivad omadused. See on võimeline lahustama mikroobseid aineid, rakulisi võõrelemente ja viirusi, mis sisenevad patsiendi kehasse. Sõltuv alt seerumis sisalduvate antikehade spetsiifilisusest eraldatakse bakteriolüsiinid, tsütolüsiinid, spirohetolisiinid, hemolüsiinid ja teised.
Neid spetsiifilisi antikehi nimetatakse "komplemendiks". Seda leidub peaaegu kõigis inimkehavedelikes, tal on keeruline valguline struktuur ja see on äärmiselt tundlik temperatuuritõusu, raputamise, hapete ja otsese päikesevalguse suhtes. Kuid kuivatatud olekus suudab see säilitadaselle lüüsivad omadused kuni kuus kuud.
Seda tüüpi seroloogilisi reaktsioone on olemas:
- bakteriolüüs;
- hemolüüs.
Bakteriolüüsi läbiviimisel kasutatakse patsiendi vereseerumit ja spetsiifilist immuunseerumit koos elusate mikroobidega. Kui veres on piisav alt komplemendi, näeb uurija, et bakter lüüsib ja reaktsioon loetakse positiivseks.
Teine vere seroloogiline reaktsioon seisneb selles, et patsiendi punaste vereliblede suspensiooni töödeldakse hemolüsiine sisaldava seerumiga, mis aktiveeritakse ainult teatud komplimendi olemasolul. Kui see on olemas, jälgib laborant punaste vereliblede lahustumist. Seda reaktsiooni kasutatakse tänapäeva meditsiinis laialdaselt komplemendi tiitri (st selle väikseima koguse, mis kutsub esile erütrotsüütide lüüsi) määramiseks vereseerumis ja komplemendi sidumise analüüsi tegemiseks. Sel viisil viiakse läbi süüfilise seroloogiline test - Wassermani reaktsioon.
Komplemendi fikseerimise reaktsioon (CFR)
Seda reaktsiooni kasutatakse nakkustekitaja antikehade tuvastamiseks patsiendi vereseerumis, samuti patogeeni tuvastamiseks selle antigeense struktuuri järgi.
Siiani oleme kirjeldanud lihtsaid seroloogilisi reaktsioone. RSK-d peetakse keeruliseks reaktsiooniks, kuna selles ei interakteeru kaks, vaid kolm elementi: antikeha, antigeen ja komplement. Selle olemus seisneb selles, et antikeha ja antigeeni vaheline interaktsioonesineb ainult komplementvalkude juuresolekul, mis adsorbeeritakse moodustunud AG-AT kompleksi pinnal.
Antigeenid ise läbivad pärast komplemendi lisamist olulisi muutusi, mis näitavad reaktsiooni kvaliteeti. See võib olla lüüs, hemolüüs, immobiliseerimine, bakteritsiidne või bakteriostaatiline toime.
Reaktsioon ise toimub kahes faasis:
- Antigeeni-antikeha kompleksi moodustumine, mis ei ole uurijale visuaalselt nähtav.
- Antigeeni muutus komplemendi toimel. Seda faasi saab kõige sagedamini jälgida palja silmaga. Kui reaktsioon pole visuaalselt nähtav, kasutatakse muutuste tuvastamiseks täiendavat indikaatorisüsteemi.
Indikaatorisüsteem
See reaktsioon põhineb komplemendi sidumisel. Tund pärast RSC seadistamist lisatakse katseklaasi puhastatud jäära erütrotsüüdid ja komplemendivaba hemolüütiline seerum. Kui katseklaasi jääb sidumata komplement, ühineb see lamba vererakkude ja hemolüsiini vahel moodustunud AG-AT kompleksiga ning põhjustab nende lahustumist. See tähendab, et RSK on negatiivne. Kui erütrotsüüdid jäid terveks, on reaktsioon positiivne.
Hemaglutinatsiooni test (RGA)
On kaks põhimõtteliselt erinevat hemaglutinatsioonireaktsiooni. Üks neist on seroloogiline, seda kasutatakse veregruppide määramiseks. Sel juhul interakteeruvad punased verelibled antikehadega.
Ja teinereaktsioon ei kehti seroloogiliste kohta, kuna punased verelibled reageerivad viiruste toodetud hemaglutiniinidega. Kuna iga patogeen toimib ainult spetsiifilistele erütrotsüütidele (kana, lambaliha, ahv), võib seda reaktsiooni pidada väga spetsiifiliseks.
Te saate kindlaks teha, kas reaktsioon on positiivne või negatiivne, vererakkude asukoha järgi katseklaasi põhjas. Kui nende muster sarnaneb ümberpööratud vihmavarjuga, on soovitud viirus patsiendi veres olemas. Ja kui kõik erütrotsüüdid on moodustunud nagu mündisammas, siis pole soovitud patogeene.
Hemaglutinatsiooni inhibeerimise test (HITA)
See on väga spetsiifiline reaktsioon, mis võimaldab teil määrata viiruste tüübi, tüübi või spetsiifiliste antikehade olemasolu patsiendi vereseerumis.
Selle olemus seisneb selles, et koos uuritava materjaliga katseklaasi lisatud antikehad takistavad antigeenide ladestumist erütrotsüütidele, peatades seeläbi hemaglutinatsiooni. See on kvalitatiivne märk konkreetse otsitava viiruse spetsiifiliste antigeenide olemasolust veres.
Immunofluorestsentsreaktsioon (RIF)
Reaktsioon põhineb võimel tuvastada AG-AT komplekse fluorestsentsmikroskoopia abil pärast nende töötlemist fluorokroomvärvidega. Seda meetodit on lihtne käsitseda, see ei nõua puhaskultuuri eraldamist ja võtab vähe aega. See on hädavajalik nakkushaiguste kiireks diagnoosimiseks.
Praktikas jagunevad need seroloogilised reaktsioonid kahte tüüpi: otsesed ja kaudsed.
Otse RIF on toodetudantigeen, mida on eelnev alt töödeldud fluorestseeruva seerumiga. Ja kaudne on see, et esm alt töödeldakse ravimit tavapärase diagnostilise ainega, mis sisaldab huvipakkuvate antikehade antigeene ja seejärel kantakse uuesti peale luminestsentsseerum, mis on spetsiifiline AG-AT kompleksi valkude suhtes ja mikroobirakud. muutuvad mikroskoobiga nähtavaks.
