Kolorimeetriline meetod - analüüs, mis põhineb uuritavate ja teadaolevate ainete värviküllastuse võrdlusel. Füüsikaliste ja keemiliste testide tulemused on suure väärtusega paljudele teadusharudele, kuid kõige enam kasutatakse uuringuid meditsiinis.
Kolimeetrilise meetodi olemus
Ainete keemilise koostise määramiseks on mitut tüüpi teste. Mõned neist on universaalsed ja on laialdaselt kasutusel erinevates valdkondades, teised on spetsiifilised, suurema täpsusega. Kolorimeetriline meetod on universaalne.
Analüüsi olemus seisneb selles, et tundmatu kontsentratsiooniga lahuse värviküllastust võrreldakse standardlahuse värviga. Analüüsi käigus moodustub uuritava komponendi interaktsiooni tulemusena teatud reagendiga värviline ühend. Pärast reaktsiooni lõppemist võrreldakse saadud tooni lahuste värviga, mille kontsentratsioon on juba teada.
Arvatakse, et kolorimeetria rajaja on Robert Boyle. Ta kasutas pigistamisttanniinid, et eristada rauda lahuses olevast vasest. Just Boyle märkas, et mida suurem on raua kontsentratsioon lahuses, seda rikkalikum oli raua toon.
Kolorimeetria
Kolimeetria on meetod aine koguse määramiseks lahustes. Analüüs põhineb Bouguer-Lambert-Beeri seadusel: kui valguskiir tabab aine tihedat neelava kihti, siis selle intensiivsus nõrgeneb.
Aine kontsentratsiooni määramise kolorimeetriline meetod võib kasutada visuaalset võrdlust või võrdlust, kasutades värvi intensiivsuse mõõtmiseks spetsiaalseid instrumente. Võrdlus toimub otsesel ja kompenseerival viisil.
- Otse. Meetod hõlmab uuritava lahuse värvuse võrdlemist vedeliku teatud tihedusel ja temperatuuril võrdluslahusega. Fotokolorimeetrite ja spektrofotomeetrite kasutamisel kasutatakse võrdluslahusena destilleeritud vett. Seadmed mõõdavad voolu intensiivsust, mis sõltub valguse intensiivsusest.
- Kompenseeriv. Meetod põhineb uuritava proovi värvi viimisel võrdlusproovile. Tulemus saavutatakse lahusti lisamisega või värvitud kandja kihi kõrguse suurendamisega.
Spektrofotomeetri, monokromaatori ja muude täppisinstrumentide kasutamine lihtsustab veelgi niigi lihtsat uurimismeetodit ja võimaldab suurendada tulemuste täpsust. Need seadmed suudavad mõõta valguse läbilaskevõimet ja määrata lainepikkust.
Kus analüüsi rakendatakse
Kolimeetrilist analüüsimeetodit kasutatakse juhul, kui on teada täpne keemiline koostis, võrdluseks on võrdlusproov ning katse ja võrdlusproovi temperatuur on sama. Kui teil on vaja kiiresti määrata värvilise aine kogus, kuid see on nii väike, et analüüsimeetodit pole võimalik rakendada.
Kolimeetriat kasutatakse meditsiinis laialdaselt kliinilistes biokeemilistes uuringutes ja muudes valdkondades:
- farmaatsiatööstus;
- toidu- ja alkoholitööstus;
- agronoomia (mullakvaliteedi määramine).
Pussid ja miinused
Kolimeetrilisel meetodil, nagu igal teiselgi, on plusse ja miinuseid.
Eelised on järgmised:
- analüüsi lihtsus, minimaalsed ettevalmistusprotseduurid;
- testimise võimalus isegi väikese koguse katsematerjaliga;
- kalleid seadmeid pole vaja, kuigi viimasel ajal on üha enam kasutatud kaasaegseid seadmeid, mis pole odavad. Kuid need annavad kõige täpsema tulemuse.
Miinused: madal analüüsi täpsus võrreldes analüütiliste meetoditega.
Biuree meetod valkude määramiseks
Vere seerumi valk on homöostaasi seisundit peegeldav näitaja. Makromolekulaarse ühendi kontsentratsiooni suurenemist veres nimetatakse hüperproteineemiaks, madalat sisaldust hüpoproteineemiaks.
Valgud seesvereseerumil on erinev koostis, struktuur, omadused, nad täidavad erinevaid funktsioone. Need jagunevad ensüümideks, hormoonideks, immunoglobuliinideks ja teisteks. Kõigil valgurühmadel on mitmeid ühiseid tunnuseid, mille põhjal on välja töötatud meetodid makromolekulaarsete orgaaniliste ühendite määramiseks bioloogilistes vedelikes.
Kõigist kliinilise biokeemia meetoditest kasutatakse valgu määramiseks kõige sagedamini kolorimeetrilisi meetodeid. Need on suhteliselt odavad, mis on eelarveorganisatsioonide jaoks oluline. ja on üsna lihtsad. Kõige tavalisem on biureedi meetod. Meetodi olemus: valgud leeliselises keskkonnas reageerivad vasksulfaadiga ja moodustavad purpurseid ühendeid. Vere valgusisalduse määrab värvumise küllastus. Biomaterjal analüüsiks võetakse hommikul tühja kõhuga.
Analüüs on väga täpne, kuid on tegureid, mis mõjutavad valgu kontsentratsiooni veres:
- füüsiline aktiivsus vahetult enne biomaterjali proovide võtmist;
- raseduse ja imetamise viimased nädalad;
- ravimite Corticotropin, Miscleron, Clofibrate kasutamine suurendab valgusisaldust veres ning pürasinamiidi ja östrogeeni kasutamine – kontsentratsiooni vähendamiseks;
- käe vale asend biomaterjali proovide võtmisel.
Raua määramine
Raua sisaldus veres on üks peamisi näitajaid erinevate haiguste diagnoosimisel. Aine on kontsentreeritud hemoglobiinis, mis tagab hapniku transpordi kudedesse. Sestraua määramine kolorimeetrilise meetodiga, enamasti kasutatakse põhireagendina batofenantroliini lahust (0,02%). Biomaterjal – seerum ilma hemolüüsi jälgedeta.
Meetodi olemus: raua ioonide ja sulfaaditud batofenantroliini vastasmõju moodustab värvilise kompleksi, mille küllastus määratakse fotomeetriliselt. Selge lahuse saamiseks on vaja järgida biomaterjali proovide võtmise reegleid, kuid raud-ligandi komplekside optiliste tiheduste täpseks määramiseks vabastatakse raud hemoglobiinist hüdroksüülamiini ja detergentide (naatriumdodetsüülsulfaat) abil. Testi tulemus määrab patoloogia olemasolu ja astme. Tavaline rauakontsentratsioon peaks olema:
- 14, 2–26,0 mol/L (mehed);
- 10, 6–21, 7 mol/L (naised).
Rauavaegust seostatakse tavaliselt verekaotuse, ebapiisava toiduga omastamise või seedetraktist halva imendumisega.
Kolesterooli test
Kolesterool on orgaaniline aine, mida leidub paljude organismide, sealhulgas inimeste rakuseinas. See on vajalik kolek altsiferooli ja steroidhormoonide tootmiseks. Normaalseks peetakse kolesterooli taset 3,37-5,2 mmol/L. Kõrgenenud sisaldus on üks peamisi ateroskleroosi põhjuseid.
Kolesterooli määramise kolorimeetrilised meetodid võimaldavad tuvastada veresoonkonnahaigusi varajases staadiumis. Patoanatoomiliste tulemuste kohaselt on isheemia surmav tulemus, lipofiilse alkoholi kontsentratsioon patsientideloli 6,5-7,8 mmol/l.
Kolimeetrilise meetodi põhimõte seisneb selles, et kolesterool oksüdeeritakse 3-beeta-hüdroksüsteroidi oksidoreduktaasi toimel, vabastades vesinikperoksiidi, mis muudab p-aminoatipüriini värviliseks ühendiks. Kolesterooli sisalduse määrab selle värvi küllastus.
Lapsel testi tehes tuleb arvestada, et lapsepõlves ei tohiks kolesterooli kontsentratsioon ületada 4,1 mmol/l.
Mis on ensümaatiline kolorimeetriline meetod?
Ensümaatilised testid põhinevad kõrge aktiivsusega ensüümide reaktsioonide kasutamisel. Neid kasutatakse laialdaselt analüütilises keemias erinevate ainete määramiseks – nitraadiioonidest makromolekulideni.
Ensümaatilised (ensümaatilised) meetodid on spetsiifilised, võimaldades teatud aineid analüüsida teiste koostiselt sarnaste ainete juuresolekul. Kõige tavalisemad meetodid, mis põhinevad ensüümi - glükoosoksüdaasi kasutamisel. Testi kasutatakse glükoosi kontsentratsiooni määramiseks veres. Testi täpsus võimaldab seda kasutada hüpoglükeemiliste ainete annuse kohandamiseks II tüüpi diabeediga patsientidel.
Glükoosi oksüdeerija meetodit peetakse üheks parimaks kvantitatiivseks meetodiks glükoosisisalduse määramiseks. Biomaterjalina võib kasutada nii verd (kapillaare) kui ka seerumit, kuid eelistatavam on plasma, kuna sellel on madalam hematokriti sisaldus, mis mõjutab negatiivselt tulemuse täpsust.
Peamiselt kasutatakse fotomeetria kineetilist meetodit. Selle olemus seisneb selles, etGlükoosi oksüdaasi ja peroksidaasi kindlaksmääratud suhe, teatud aja jooksul pärast reaktsiooni algust on värvilise ühendi moodustumise kiirus proportsionaalne glükoosi tasemega proovis. Testi peamine eelis on see, et tulemust ei mõjuta kolmandate osapoolte ühendite olemasolu proovis. Meetodil on ka puudus - testimiseks on vaja Saksa või Rootsi tootjate kalleid mõõteriistu.
Järeldus
Kolimeetriline meetod on täpne ja hõlpsasti kasutatav. Selle kasutamine meditsiinis võimaldab varakult avastada erinevaid patoloogilisi muutusi organismis. Uute tehnoloogiate kasutuselevõtuga meetodit täiustatakse ja see muutub üha populaarsemaks.
