C-hepatiit on maksainfektsioon, mille põhjustab Flaviviridae HCV viirus, mis koosneb ühest või mitmest RNA molekulist. Reeglina võetakse patsiendil C-hepatiidi tuvastamiseks rida diagnostilisi meetmeid. PCR on analüüs, mis kinnitab täpselt diagnoosi. Sageli teevad järelduse arstid, kui patsiendil on juba esimesed haigusnähud.
Mis on C-hepatiit
Vere või seksuaalse kontakti kaudu leviva viirusnakkuse põhjustatud maksakahjustust nimetatakse meditsiinis C-hepatiidiks. Haigusetekitaja on Flaviviridae sugukonna mittetsellulaarsete nakkusetekitajate RNA-d sisaldav viirus. Nakkus võib püsida kehas pikka aega, ilma ennast endast märku andmata. Seetõttu loetakse C-hepatiit (diagnoosina) õigustatuks ainult siis, kui mikroorganism avastatakse vereanalüüsi abil, kasutades PCR RNA RNA-d.
Flaviviirust ei toodeta kunstlikult kasvatatud isoleeritud rakkudes. Paljunemisprotsessis tekitab nakkustekitaja immunoloogiliselt eristatavaid modifikatsioone. Need tegurid takistavad kehal andmistasjakohane kaitsereaktsioon ja ekspertidel on raskusi tõhusa vaktsiini väljatöötamisega.
Viirus edastatakse parenteraalselt. Nakatumiseks peab see piisavas koguses sisenema otse vereringesse.
Milliseid teste C-hepatiidi suhtes tehakse
Maksa viiruspatoloogiaid diagnoositakse laboratoorsete testide abil. C-hepatiidi kliinilised uuringud viiakse läbi, uurides võõr- ja ohtlikke antigeene või valguühendeid (antikehi) patsiendi biomaterjalis, peamiselt veres.
- Ensümaatiline immuunanalüüs (ELISA). Meetod põhineb lgM antikehade tuvastamisel veres. Immunoglobuliini peetakse suurimaks ja see on pentameer. See väljendub lümfotsüütide esmases kaitsereaktsioonis tundmatule võõrainele.
- Radioimmunoanalüüs (RIA) – lgM immunoglobuliini kvantitatiivne määramine, kasutades märgistatud joodi radioaktiivset isotoopi.
- C-hepatiidi PCR – viiruse RNA määramine biomaterjalis (veres). See analüüs kinnitab diagnoosi usaldusväärselt.
IgG testimine ei ole usaldusväärne. Selle esinemine vereseerumis võib viidata mitte ainult flaviviiruse esinemisele, vaid ka mõnele muule sama patogeeniga varasemale infektsioonile.
Mis määrab PCR analüüsi
Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) põhineb teatud patogeenidele spetsiifiliste DNA piirkondade tuvastamisel uuritava materjali proovides (epiteel, veri). Analüüs võimaldab tuvastada patogeenseid väikseimaid organisme (viiruseid), tuvastades nende RNA või DNA bioloogilises materjalis.
Antikehade tuvastamise laboriprotseduur C-hepatiidi PCR viiakse läbi kolmes etapis:
- Valige. Uuritud biomaterjal puhastatakse lisanditest ja DNA saadakse kromatograafilise kolonni liikuvas faasis.
- võimendus. Analüüs viiakse läbi seadme-termostaadi tsükleris. See soojendab ja jahutab katseklaase teatud tsüklilisusega. Ühe uuringu jaoks tehakse kuni 35 tsüklit. Tulemuseks on piisav arv DNA fragmente patogeeni tuvastamiseks, tuvastamiseks ja hindamiseks.
- Elektroforees. Saadud fragmendid asetatakse agaroosi erineva küllastusega geeli ja viiakse läbi elektroforees. Saadud elektroferogrammi analüüsitakse arvutis.
Kasutatakse mitte ainult standardset PCR-uuringut, vaid ka reaalajas PCR-analüüsi. See on reaalajas diagnostika. Meetod võimaldab kvalitatiivset ja kvantitatiivset analüüsi, mis võimaldab tuvastada haiguse kujunemist ja dünaamikat, samuti määrata ravi, mille eesmärk on kõrvaldada patoloogia päritolu põhjus. Reaalajas PCR-i kasutatakse ka nakkusetekitajate puhaskultuuri määramiseks (genotüpiseerimine).
Kuidas polümeraasi ahelreaktsiooni testi tehakse
Diagnoosimiseks võib kasutada mis tahes inimese bioloogilist vedelikku. C-hepatiidi testimise biomaterjal on tavaliselt veri.
Proovide võtmine diagnostikaks viiakse läbi protseduuriliseltkontor. Vere võtmiseks kasutage vere hüübimist pärssiva ainega ühekordseid katseklaase. Tegevused, mis on suunatud nakkusetekitajate leviku tõkestamisele, aitavad vältida teise mikroorganismitüve sisenemist väljastpoolt.
C-hepatiidi PCR jaoks võetakse verd hommikul tühja kõhuga. Proov saadetakse kohe laborisse. Biomaterjali on lubatud hoida temperatuuril +4 kuni +8 kraadi Celsiuse järgi. Konteinerid on märgistatud ja varustatud juhistega. Testi tulemused on saadaval 48 tunni jooksul, mõnikord varem.
PCR tüübid
Polümeraasi ahelreaktsiooni rakendusala on üsna lai. Infektsionistid määravad PCR abil B-hepatiidi, verdimevate putukate poolt edasikanduvad haigused, AIDSi, tuberkuloosi. Onkoloogias tuvastatakse seda meetodit kasutades kasvajarakud varajases staadiumis.
Analüüsitüüpe on umbes neliteist. Ühe või teise tüübi kasutamine sõltub analüüside mahust ja lõpptulemustest. Teatud tüüpi PCR on hädavajalik, kui tulemust on vaja 20 minuti jooksul.
C-hepatiidi diagnoosimiseks kasutatakse 3 tüüpi polümeraasi ahelreaktsiooni:
- Kvalitatiivne hinnang võib olla kas positiivne, mis näitab infektsiooni olemasolu organismis, või negatiivne, mis näitab flaviviiruse puudumist.
- Reaalajas PCR (kvantitatiivne analüüs) – määrab patogeeni kvantitatiivse RNA RÜ/ml.
- Genotüpiseerimine on analüüs, mis paljastab viiruse tüübi (genotüübi).
Haiguse täpseks tuvastamiseks ja määramiseks, millele järgneboptimaalse ravi määramiseks kasutatakse kõiki kolme tüüpi uuringuid.
Kvalitatiivne polümeraasi ahelreaktsiooni analüüs
Analüüs on kohustuslik kõigile, kellel on ELISA, mis on tuvastanud HCV-vastaseid antikehi. C-hepatiidi kvalitatiivne PCR on standardne tundlikkuse test. Meetod on suunatud ainult avastamisele, muid aineid ei loeta ega eraldata.
Antikehade tuvastamiseks kasutatakse spetsiaalseid testimissüsteeme, mille tundlikkuse lävi on vähem alt 50 RÜ/ml. Antikehade tuvastamisel määratakse muud selgitavad testid. Kui tulemus on negatiivne, siis täiendavaid katseid ei tehta.
Mõnel juhul võib valenegatiivne tulemus olla tingitud ebapädevatest laboritöötajatest või halva kvaliteediga reaktiividest. Kindlustuse jaoks on parem analüüs mujal teha.
Kvantitatiivne PCR
Meetodit kasutatakse flaviviiruste arvu otseseks uurimiseks ühes reaktsioonitsüklis. Täpse mõõtmise jaoks kasutatakse hübridiseerimiseks kasutatud DNA fragmente või fluorestsentsmärgistatud praimereid. SYBL Greeni värviga on ökonoomne tuvastamisvõimalus. Värv kiilutakse DNA väikesesse soonde ja muutub laseriga kiiritamisel siniseks.
Kontsentratsiooni määrab aparaat-võimendi digitaalses ekvivalendis. Väärtused võivad laborites veidi erineda ja seetõttu tuleks neid võrrelda võrdlusväärtustega.
Kvantitatiivne PCRC-hepatiit aitab valida ravimite optimaalse annuse ja määrata ravi kestuse. Uuringu sagedus sõltub haiguse staadiumist, genotüübi tüübist ja ettenähtud ravikuurist.
Genotüübi määramine
C-hepatiidi viirusel on varieeruv geneetiline ülesehitus. Arvukad modifikatsioonid muudavad vaktsiini loomise võimatuks ja raskendavad ka ravi. Kokku on tuvastatud ja registreeritud 11 genotüüpi ja 100 alatüüpi. Endise NSV Liidu riikides tuvastab PCR C-hepatiidiga nakatunud inimestel peamiselt genotüübid 1b ja 3.
Mistahes genotüübi olemasolul võib tsirroos või maksavähk hullama hakata. Seetõttu on nii oluline viirus õigeaegselt avastada.
Mõnede patsientide jaoks on teatud HCV-ga võitlemiseks loodud ravimid mürgised. Genotüpiseerimine võimaldab määrata valgu tüübi ja välja kirjutada tõhusa ravimi.
Tüpiseerimistestide tulemustes on väikese ladina tähega number, mis näitab viiruse genotüüpi. Kui HCV tuvastatakse, kuid tüüpe ei määrata, tähendab see, et inimese genotüüp ei ole teatud geograafilise piirkonna jaoks tüüpiline.
Analüüsi tulemused
Tulemuste dešifreerimisega tegeleb arst. Ainult mitmete uuringute andmed (koos anamneesi ja uuringutega) võivad anda üldise tegeliku pildi haigusloost.
- Tervel inimesel ei tuvasta biomaterjali kvalitatiivse reaktsiooni test midagi. Kui on näidatud väärtus "tuvastatud", kinnitatakse infektsioon ja patsientvajab täiendavat diagnoosi, millele järgneb ravi.
- Nakkustekitajate arvu määramine võimaldab hinnata organismi viiruskoormust. Tavaliselt C-hepatiidi kvantitatiivne PCR patogeeni ei tuvasta. Näitajat kuni 810^5 peetakse väikeseks koormuseks ja see tagab õige ravi korral soodsa tulemuse. Kõrgemad väärtused nõuavad põhjalikku uurimist ja pikaajalise ravi määramist, mille positiivset tulemust ei saa keegi garanteerida.
- Positiivsed genotüpiseerimise tulemused näitavad, milline genotüüp tuvastatakse. Negatiivne tulemus näitab kas flaviviiruse puudumist või genotüübi olemasolu, mis ei ole sellele piirkonnale tüüpiline.
Mida näitab positiivne PCR-test
Iga tõsine haigus nõuab põhjalikku diagnoosi. Positiivne C-hepatiidi PCR kinnitab diagnoosi, kuid ennustusi saab teha alles pärast täiendavaid laboratoorseid ja instrumentaalseid uuringuid.
Viiruse tuvastamine ei anna patoloogiast täielikku pilti. On vaja kindlaks teha selle tüüp ja olemus, teha kindlaks, kuidas see mõjutab maksa ja muid elundeid. HCV varajasel avastamisel on sageli soodne ravitulemus.
Negatiivne PCR positiivse ELISA-ga
Maksakahjustusele iseloomulikke sümptomeid jälgides on suur tõenäosus, et infektsioon on juba organismi sattunud. Seetõttu peaksite pöörduma hepatoloogi või nakkushaiguste spetsialisti poole. Vestluste käigus kogub spetsialist anamneesi ja määrab vajaliku läbivaatuse.
KuiC-hepatiidi PCR-i uuringute tulemused on negatiivsed ja ensüümi immuunanalüüs on positiivne, see näitab flaviviiruse antikehade olemasolu veres. Tavaliselt juhtub see siis, kui infektsioon satub kehasse väikeses koguses, mistõttu immuunsüsteem tuli sellega ise toime. Kuid selliseid inimesi peetakse endiselt nakatunuteks ja neid tuleb kontrollida iga 6 kuu tagant. Kui selliste testitulemuste korral keeldutakse inimesele tasuta arstlikust läbivaatusest, on parem tervise säilitamiseks teha tasuline PCR ja kui tulemused on positiivsed, võtke diagnoosi ja ravi saamiseks ühendust spetsialistiga.
Meetodi eelised ja puudused
C-hepatiidi diagnoosimisel on PCR-l mitmeid eeliseid:
- Patogeeni varajane avastamine.
- Viiruse täpne määratlus.
- Diagnostika tõhusus.
- Minimaalne veamäär.
- Kõrge tundlikkus.
Meetodi puudused:
- Analüüsi kõrge hind. Test nõuab kalleid seadmeid, reaktiive ja kõrgelt kvalifitseeritud meditsiinitöötajaid. Kõik kokku annab märkimisväärse summa.
- Karmid nõuded biomaterjali transportimisel.
Maksapõletiku ravi
C-hepatiidi viiruse PCR-analüüsi peetakse diagnoosimisel oluliseks, kuid mitte lõplikuks. Et ravi oleks efektiivne, on vaja mitmeid täiendavaid laboratoorseid ja instrumentaalseid uuringuid. Pärast kõigi läbimistdiagnostilised meetmed, mida arst määrab ravi:
- Dieet nr 5 on ette nähtud.
- Alkohol on täielikult välistatud.
- Interferooni ja ribaviriini ühine vastuvõtt 25 päeva jooksul.
- Hepaprotektorite kursused "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- Erijuhtudel kasutatakse diskreetset plasmafereesi.
Hepatoloogi poolt välja kirjutatud ravimeid kasutatakse regulaarselt, ilma annust muutmata. Ravimite võtmise kestuse määrab arst pärast kontrolltestide läbimist. Pärast ravikuuri läbimist peate külastama arsti iga kuue kuu tagant.
PCR-diagnostika võimaldab tuvastada C-hepatiidi tekitaja varajases staadiumis. See aitab kaasa ravi efektiivsusele ja hoiab ära haiguse ülemineku sellistesse ohtlikesse vormidesse nagu tsirroos ja hepatotsellulaarne kartsinoom.
